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　　摘要：《Cardiovascular Research》刊發的文章中，研究人員使用低壓加速基因槍GDS-80，按照制造商的方案將質粒轉染到VSMC中。將2mg質粒DNA懸浮于5ml PBS中，并在15psi的氦氣壓力下輸送至培養的血管平滑肌細胞。該方法的轉染效率為30%。結果表明GADD153在牽張誘導的VSMC凋亡中起作用。

　　GADD153(生長停滯和DNA損傷誘導基因153)是一種凋亡調節基因，在內質網(ER)應激期間表達增加。機械拉伸如何影響血管平滑肌細胞凋亡過程中GADD153的調節尚不完全清楚。

　　在《Cardiovascular Research》中的一篇報道中，研究人員通過使用低壓手持式基因槍向血管平滑肌細胞中投遞大鼠GADD153啟動子構建體，驗證了機械牽張誘導凋亡的血管平滑肌細胞中GADD153表達的假說。

　　研究人員將生長在柔性膜上的大鼠血管平滑肌細胞以60周/分鐘的速度真空拉伸至最大延伸率的20%。采用成年大鼠主動脈-腔靜脈分流模型研究GADD153的表達。拉伸18小時后，周期性拉伸顯著增加GADD153蛋白和mRNA的表達。拉伸前30min加入c-jun N末端激酶(JNK)抑制劑SP600125、JNK siRNA、腫瘤壞死因子-a(TNF-a)和TNF-α受體抗體可抑制GADD153蛋白的誘導。

　　一個-845到+85 bp的大鼠GADD153啟動子構建體如下。用正向引物ctcgaggaaggca-taagagccatca和反向引物ccgcttctcctcagggttccggctgt擴增大鼠基因組DNA。擴增產物經M1uI和Bg1II限制性內切酶酶切后連接到用相同酶切的pGL3堿性熒光素酶質粒載體中。GADD153啟動子包含AP-1保守位點(TGACTCA)，位于–246到–240 bp。對于突變體，使用突變試劑盒突變AP-1結合位點。DNA測序證實了位點特異性突變。使用低壓加速基因槍GDS-80，按照制造商的方案將質粒轉染到VSMC中。將2mg質粒DNA懸浮于5ml PBS中，并在15psi的氦氣壓力下輸送至培養的血管平滑肌細胞。該方法的轉染效率為30%。

　　凝膠位移實驗表明，牽張后激活因子1(AP-1)的DNA結合活性增強。SP600125、JNK-siRNA和TNF-a抗體可消除牽張誘導的結合活性。拉伸增加，而GADD153 Mut質粒、SP600125和c-jun抗體消除了啟動子活性。牽張血管平滑肌細胞的條件培養液和外源性給予非牽張血管平滑肌細胞TNF-α重組蛋白均可增加GADD153蛋白的表達，與牽張后相似。成年大鼠主動脈-腔靜脈分流術的體內模型也顯示主動脈中GADD153蛋白表達增加。

　　周期性牽張增強培養大鼠血管平滑肌細胞GADD153的表達。牽張誘導的GADD153由TNF-α介導，至少部分通過JNK和AP-1途徑介導。這些結果表明GADD153在牽張誘導的VSMC凋亡中起作用。

　　[1] The molecular regulation of GADD153 in apoptosis of cultured vascular smooth muscle cells by cyclic mechanical stretch[J]. Cardiovascular Research, 2008(3):551-9.